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技术服务
IP-MS ; Co-IP-MS, 互作蛋白检测及鉴定

免疫(共)沉淀与质谱联用即常说的Co-IP-MS / IP-MS(Co-Immunoprecipitation Mass Spectrum,Immunoprecipitation Mass Spectrum),是发现研究蛋白互作蛋白的一种重要利器。免疫共沉淀或免疫沉淀(Co-IP-MS / IP-MS)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法,是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 细胞在非变性条件下被裂解时,细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。用特异性抗体或其他亲和试剂与靶标蛋白的亲和作用,通过免疫共沉淀将靶标蛋白与靶标蛋白的相互作用蛋白从复杂的样本中提取出来,进而进行质谱检测以鉴定靶标蛋白的相互作用蛋白。

Co-IP1.png以检测细胞内与FGF1蛋白相互作用的分子为例:                
质谱鉴定实验流程(胶内酶解或溶液内酶解)
1:胶内酶解
  未标题-3.jpg
2:溶液内酶解
  未标题-4.jpg    

使用仪器
Thermo Scientific Q Exactive (高分辨质谱)

                    
技术优势
适合中度复杂的蛋白质样品, 如相互作用的蛋白质条带和洗脱液; 高准确性, 高灵敏度。
实验报告内容
1、相互作用蛋白质谱定性鉴定结果,定量分析;
2、完整的实验步骤、使用仪器、试剂来源、软件检索参数等。
 
蛋白样品送样要求

样品样品要求
SDS-PAGE条带考染,条带清晰可见
蛋白质溶液蛋白质总量>5μg,浓度>0.1μg/μl;
说明裂解液和洗脱液成分,浓度信息
                                   

实验样本预处理及运输注意事项
为保证高质量的技术服务结果,请您参照以下说明对实验样本进行处理和保存:
⊙蛋白洗脱液:定量并计算总蛋白量,真空干燥后,密封好管口,冰袋包装寄送。
⊙蛋白质条带(考染):从凝胶上割取条带时,避免污染,将条带放入EP管内,密封好管口,冰袋包装寄送。
特别提醒:快递寄送样本运输过程中,可能晃动幅度会比较大,请做好基本运输防护措施。
注:在寄送样本时,请填写好样本登记表,随样本一同寄往本公司。

IP-MS联用成功案例结果展示:
ip-ms-data3-01.png微信截图_20220925001736.jpg参考文献:

Chen, Y., Jiang, T., Zhang, H. et al. LRRC31 inhibits DNA repair and sensitizes breast cancer brain metastasis to radiation therapy. Nat Cell Biol , 22, 1276–1285 (2020). https://doi.org/10.1038/s41556-020-00586-6


Progga Sen, et, al. Identification of p115 as a novel ACSL4 interacting protein and its role in regulating ACSL4 degradation. Journal of Proteomics, Volume 229, 30 October 2020, 103926   
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