定量蛋白质组学方法也可以用label-free的方法,即非标记法。非标记蛋白质组定量质谱检测的优点就是样品上机前,不需要特殊标记操作,操作非常方便,也节省了标记试剂的费用。结合使用Maxquant软件进行分析,可以做到定量检测。Maxquant软件非标记定量分析是以MS1为基础,实验证明结合Maxquant软件分析的非标记技术具有较好的定量准确性和可靠性。最新一代Orbitrap Exploris 480高性能质谱仪能极大的提高蛋白质组检测的深度或覆盖度,检测结果具有更高的重复性,能检测蛋白质组微量蛋白的变化。
◆ 蛋白质组学非标记定量分析的特点
1. 对液相色谱串联质谱的稳定性和重复性要求较高
2. 无需昂贵的标记试剂
3. 对样本的数量无限制,克服了标记定量技术在对多个样本进行定量方面的缺陷
检测流程:
使用仪器:
Thermo Scientific Exactive HF,HFX, Orbitrap Exploris 480 质谱仪
技术优势:
采用新一代高分辨率质谱仪,检测更灵敏 ,覆盖度更高
丰富的质谱检测与数据分析经验
样品要求:
实验样本预处理及运输注意事项:
检测样品 | 样品 要求 |
细胞样品 | 细胞数量 >5×106 |
组织样品 | 动物植物组织 >10mg |
蛋白质溶液 | 蛋白质总量>200μg,浓度>1μg/μl;说明裂解液成分,浓度信息等 |
⊙蛋白质溶液:定量并计算总蛋白量,密封好管口,干冰包装寄送。
特别提醒:快递寄送样本运输过程中,可能晃动幅度会比较大,请做好基本运输防护措施。
注:在寄送样本时,请填写好样本登记表,随样本一同寄往本公司。
实验周期:
样品数目 | 2-6个 | 7-10个 | 10个以上 |
实验周期 | 3 weeks | 4 weeks | 5 weeks |
参考文献:
Bekker-Jensen et al., A Compact Quadrupole-Orbitrap Mass Spectrometer with FAIMS Interface Improves Proteome Coverage in Short LC Gradients, Molecular & Cellular Proteomics, 2020 19, 716 –729
Piero Giansanti, et al., Mass spectrometry-based draft of the mouse proteome, Nature Methods volume 19, pages803–811 (2022)